口服利福平海藻酸鈉微球

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口服利福平海藻酸鈉微球

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ＨｅｍｌｄｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅＶ０１．２６Ｎｏｔ２Ｄｅｃｅｍｂｅｒ２００７

口服利福平海藻酸鈉微球的制備‘

王心靜１，王�。保枇ⅲ�，鄭越２

（解放軍總醫(yī)院第二附屬醫(yī)院１．結(jié)核病研究所；２．藥劑室，北京１０００９１）

［摘要】

目的研制口服利福平海藻酸鈉微肆。方法采甩靜電液滴法制備利福平海藻酸鈉微球，滟Ｉ定粒徑太

小、包封率、我藥量廈其影響因素，考察微球的俸外釋放特點(diǎn)。結(jié)果微球球形圓整，分散性好，平均粒徑７０２¨ｍ，包封率８３．５％，栽藥量１７１％，在模擬腸液中的釋放呈快慢相，時(shí)間長(zhǎng)而藥物釋放完全。結(jié)論以海藻酸鈉、硬脂酸為材料，用靜電液滴法制備利福平微球，珠徑小、包封卓高、釋藥時(shí)間長(zhǎng)．工藝簡(jiǎn)便。

［關(guān)鍵詞】利福平；微球；海藻酸鈉；硬脂醴［中圖分類號(hào)］Ｒ９７８３；ＴＱ４６０

６

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼］Ａ

［文章編號(hào)］】∞４胛８ｌ（２００７）１２—１４８６＿０３

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近年來(lái)，藥物緩釋日益受到重視。微球成為良好器（鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司）。

１．２制備方法硬脂酸加熱熔融，與利福平二甲基距砜溶液攪拌混合，攪拌條件下加進(jìn)海藻酸鈉溶液，倒人注射器，將靜電場(chǎng)發(fā)生器正極與注射器尖端連接，負(fù)極

的緩釋藥物載體。天然高分子材料海藻酸鈉具有良好

的穩(wěn)定性和生物相容性，作為醫(yī)藥材料在人體的實(shí)際

應(yīng)用。已經(jīng)被藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)證明可行。海藻酸鈉與鈣離子接觸時(shí)會(huì)瞬時(shí)凝膠化，可利用此特性對(duì)多種物質(zhì)進(jìn)行包埋，這一制備過(guò)程簡(jiǎn)單，避免有機(jī)溶劑．可以增加

與氯化鈣溶液連接，在注射器推動(dòng)力和電場(chǎng)力作用下，原料液滴人低溫氯化鈣（ｃａｃｌ：）溶液，迅速固化。形成

海藻酸鈣凝膠微球，浸泡約２０ｍｉｎ后，蒸餾水清洗２

藥物穩(wěn)定性，降低藥物在體內(nèi)的副作用，延長(zhǎng)藥物療效川。筆者研制了結(jié)核病治療的一線藥物——利福

平的口服海藻酸鈉微球。報(bào)道如下。ｌ材料與方法

１．１

或３次，真空避光室溫干燥１２

ｈ。

１．３微球粒徑的測(cè)定取少量干燥微球置于載玻片上，加１％吐溫８０溶液１滴，用滴管頭仔細(xì)涂布均勻，

材料與儀器利福平（ＲＦＰ）、海藻酸鈉（ＡＬ，中

小心加上蓋玻片，將其置于光學(xué)顯微鏡下檢測(cè)，分別記

錄５個(gè)視野內(nèi)的粒子數(shù)目和各種粒徑大小共３００個(gè)，

等黏度）、硬脂酸（ｓＬ）、二甲亞砜均為分析純，購(gòu)自

ｓｉ舯ａ公司，氯化鈣（分析純，北京化工廠），甲醇（化學(xué)

純，北京化工廠），高壓靜電液滴發(fā)生器（自制），

粒徑分布按特定范圍內(nèi)的數(shù)目與總數(shù)目之比計(jì)算。

１．４包封率、載藥量的測(cè)定精確稱量一定質(zhì)量的微球置于甲醇中，２５℃持續(xù)振搖加ｈ，用孔徑０４５¨ｍ

ＢｅｃｋⅢａⅡＤｕ＿８００紫外可見(jiàn)分光光度儀，０ｌｖｍｐｕｓＢＨ光

學(xué)顯微鏡及ｃ＿３５ＡＤ照相系統(tǒng)．ｓａｒｔｏｎｕｓ

ａｎａｌｙｔｌｃＡ２００ｓ

精密電子分析天平，ｓｊＱ－７型數(shù)顯直流無(wú)極調(diào)速攪拌

【收稿日期］２００７ｍ３．０８［基金項(xiàng)目］

金編號(hào)：０６２０５６）

微孔濾膜過(guò)濾后采用紫外分光光度法測(cè)定包封率，在

波長(zhǎng)２５４ｎｍ處測(cè)其吸光度（＾值），按標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算藥物含量（ｃ），標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為Ａ＝０．０３８

０．００４

６ｃ十

【修回日期］２００７—０４－１ｌ

’解放軍總后勤部十一五課題資助項(xiàng)目（基

５（ｃ：峭?ｍＬ～，ｒ＝０９９４），線性范圍：２—

［作者簡(jiǎn)介］王心靜（１９７４一），女，北京人．主治醫(yī)師，在讀博士，研究方向：結(jié)核病的治療。電話：ｏｌｏ一６６７７５９６９，Ｅ．

１８弘ｇ?ｍＬ～。

按下列公式計(jì)算包封率＝（Ｐ×ｃ）／占×１００％，載藥量＝（ｙ×ｃ）／Ｄ×１００％，ｙ為溶解介質(zhì)體積，ｃ為測(cè)

ｍａｉｌ：２ｈ�。校幔睿洌穑澹幔悖澹丽aｈｕ．㈣ｏ

萬(wàn)方數(shù)據(jù)

醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)２００７年１２月第２６卷第１２期卷終

得的釋放介質(zhì)濃度，單位為斗ｇ?ｍＬ～，占實(shí)驗(yàn)中實(shí)際投入的利福平量，Ｄ為微球質(zhì)量。

１．５體第一文庫(kù)網(wǎng)外釋放實(shí)驗(yàn)按《中華人民共和國(guó)藥典》２０００

年版釋放度測(cè)定法中的轉(zhuǎn)籃法，溶出遞質(zhì)為鹽酸（Ｈｃｌ）溶液（ｐＨ

１

２）和磷酸鹽緩沖液（ｐＨ７．４）

ｌｏｏｍＬ，恒溫?cái)嚢�，遞質(zhì)溫度：（３７±０．１）℃，轉(zhuǎn)速為１００ｒ－ｍｌｎ。在一定時(shí)間點(diǎn)上取樣５ｍＬ，并加人

５

ｍＬ新鮮遞質(zhì)，取樣用｝Ｌ徑Ｏ．４５“ｍ微孔濾膜過(guò)濾，

用紫外分光光度法測(cè)定，按標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算微球的累積釋藥量。重復(fù)３批樣品，取平均值。２結(jié)果與討論

２

ｌ制備工藝對(duì)微球粒徑的影響微球的成球性良好，球形規(guī)整。使用靜電液滴法制備微球，各實(shí)驗(yàn)條件在一定范圍內(nèi)對(duì)微球粒徑影響較小。通過(guò)調(diào)整制備工藝的主要因素：電場(chǎng)的分布，液體流量電壓及硬脂酸、海藻酸鈉的比例等，可制得平均粒徑（７０．２±４．３）¨皿的微球。

通過(guò)控制電場(chǎng)的分布、液體流量、電壓等因素，可以縮小粒徑，提高粒徑的均一度。注射器銳孔至液面間距保持約３ｃｍ時(shí)，隨著液面至燒杯口距離的減少，制備的微球粒徑趨向均一。液面接近燒杯口減少了暴露的電極及燒杯四壁對(duì)電場(chǎng)分布的影響，一定程度上減步了子液滴的產(chǎn)生。而當(dāng)液體流速較快或銳孔至液面間距過(guò)小時(shí)，液滴相互之間的距離較小，連續(xù)落人氯化鈣溶液后形成的微球不易分散而粘連成絮狀，不能充分的和鈣離子發(fā)生凝膠化反應(yīng)。而只有當(dāng)電壓大于一定值時(shí)，液體才會(huì)形成“錐一射流”的狀態(tài)，得到粒徑較小的單分散的微球，然而電壓過(guò)大，液柱形成噴射，產(chǎn)生更多的子液滴”’３ｏ。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示電壓為（１．５～２．０）ｘ１０４Ｖ時(shí)效果最好。

作為阻滯劑的硬脂酸可以有效地提高緩釋性，但是靜電液滴法必須保證液滴可以在氯化鈣溶液中迅速沉降，如果硬脂酸比例過(guò)高，原料液液滴不能迅速向氯化鈣溶液中沉降，在氯化鈣溶液液面不能收縮成球體，在鈣離子作用下，隨即被固化成無(wú)定型凝膠。硬脂酸和利福平質(zhì)量比ｌ：１時(shí)微球制作過(guò)程最順利，對(duì)粒徑的影響最小。

隨著海藻酸鈉的濃度增高，溶液的黏稠度亦增加，粒徑范圍增寬。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示為獲得孔徑＜１００燦Ⅲ粒徑均一的微球，海藻酸鈉濃度不宜）２％。

２２藥物包封率的測(cè)定廈影響因素

２

２．１測(cè)定方法文獻(xiàn)報(bào)道測(cè)定海藻酸鈣凝膠微球

包封物的含量需要微球解聚，用磷酸鹽、檸檬酸鹽等緩沖液溶蝕微球后進(jìn)行測(cè)定”’１。但是實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，海

萬(wàn)

方數(shù)據(jù)?１４８７

藻酸與利福平的吸收峰相干擾。利福平易溶于甲醇。海藻酸鈣不能溶于甲醇，硬脂酸微溶于甲醇，其與甲醇的酯化反應(yīng)須在一定溫度和催化劑存在的條件下才能發(fā)生”］。測(cè)定利福平和硬脂酸的甲醇溶液吸收峰，峰形和位置與利福平甲醇溶液的標(biāo)準(zhǔn)峰一致，而且微球經(jīng)過(guò)甲醇浸泡振搖一定時(shí)間后再經(jīng)磷酸鹽緩沖液解聚測(cè)定，測(cè)不出利福平吸收峰。因此本實(shí)驗(yàn)測(cè)定方法具有良好的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性，而且操作簡(jiǎn)便。

２．２．２影響因素文獻(xiàn)報(bào)道利福平等抗結(jié)核藥的海藻酸鈉微球和海藻酸鈉－殼聚糖微球制備方法是海藻酸鈉利福平混合物與鈣離子交聯(lián)，其包封率分別達(dá)到

７０％和８５％”’“。但是實(shí)驗(yàn)中筆者發(fā)現(xiàn)利福平很快釋

放到鈣溶液及之后的蒸餾水清洗液中，包封率只有６４．２％，但是加人一定比例的硬脂酸后包封率顯著提

高（表１）。硬脂酸比例（僻／Ⅳ）增加，包封率提高，但

高硬脂酸比例影響微球制作和微球粒徑，故選擇利福平和硬脂酸質(zhì)量比為１：１。

利福平與海藻酸鈉的比例對(duì)包封率有一定的影響，隨海藻酸鈉比例增高，一方面交聯(lián)充分，另一方面形成的微球數(shù)量增多，包封率亦提高，但增加了微球的質(zhì)量，使載藥量逐漸降低。

海藻酸鈉濃度不但影響微球粒徑，對(duì)包封率亦有明顯影響。海藻酸鈉濃度＜２．５％之前包封率和載藥量逐漸增大，之后隨著海藻酸鈉濃度的增大而減小。濃度太低，不能形成微球或微球機(jī)械強(qiáng)度低，不能有效包埋藥物；濃度過(guò)高，黏度增大，噴制困難，微球變形，包埋效果不好。

海藻酸鈉與Ｃａ２＋的交聯(lián)時(shí)剮與微球的交聯(lián)程度密切相關(guān)，而交聯(lián)程度直接影響微球的包封率，時(shí)間過(guò)短，交聯(lián)程度不夠，不能形成“蛋箱”樣結(jié)構(gòu)的致密微球，微球強(qiáng)度不足，包封率低。時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，利福平向溶液中擴(kuò)散損失增加，包封率下降，而且微球顏色發(fā)生變化，提示利福平被氧化。本實(shí)驗(yàn)提示２０ｍｉｎ交聯(lián)時(shí)問(wèn)效果良好，與ＰＡＮＤＹ等”１報(bào)道的８～ｌＯｍｉｎ有明顯差別。見(jiàn)表ｌ，２。

表ｌ制備工藝對(duì)微球性狀的影響

㈣號(hào)：鬻：篇平囂桫載摯他≯

＾１１：Ｏｌ：ｌ７０Ｏ±３．５１７６“２

＾２１：１１：ｌ７３３±８７１Ｂ０７ｌ

３

Ａ３１：２ｌ：ｌ７６５±１７．２１８３７８２Ｂ１１：ｌｌ：３７０２±４３１７．１８３５Ｂ２

１：ｌ

ｌ：６

６８４±１０９

１５４

８６５

２．３藥物體外釋放性能見(jiàn)圖１，顯示在最優(yōu)條件下制備的微球在鹽酸和磷酸鹽緩沖液的釋放情況。利福

?１４８８

平在酸性條件下的釋放比在堿性條件下慢得多，這是

海藻酸鈣對(duì)不同ｐＨ值環(huán)境反應(yīng)不同的結(jié)果。在酸性

環(huán)境中，海藻酸鈣收縮，形成更緊密的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，藥物

主要通過(guò)擴(kuò)散作用釋放出來(lái)，速度緩慢。在堿性環(huán)境

中，鈣離子與海藻酸交聯(lián)解離，利福平呈現(xiàn)更快的釋放行為。從體外釋放的結(jié)果可以看出，藥物在前４ｈ釋放速度較快，隨后呈現(xiàn)一個(gè)緩慢的釋放過(guò)程。由此結(jié)果推測(cè)，一些藥物可能吸附在微球的表面，或者以分子形式沉淀在微球的表面，表面藥物溶出，產(chǎn)生了釋放初期的突釋現(xiàn)象；而更多的藥物則是分散在載體骨架中，骨架材料的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)和硬脂酸阻滯劑的存在限制了藥物的釋放和擴(kuò)散速率，使藥物的釋放呈現(xiàn)緩慢和持續(xù)性的特點(diǎn)。因此微球中利福平的釋放是由快慢兩部分

構(gòu)成，這樣既可保證短時(shí)間內(nèi)有大量釋藥，也可維持有

一定量藥物持續(xù)釋放。由于海藻酸鈣微球?qū)儆谀z狀顆粒，具有高孔隙率的結(jié)構(gòu)”ｏ，結(jié)構(gòu)較疏松，在堿性溶液的溶蝕作用下．微球解聚，其中藥物釋放完全。

樣品編號(hào)囂交黑問(wèn)７

表２交聯(lián)時(shí)間對(duì)包封率的影響

８＝三：包≯

ｌ２５１０ｌ：ｌ：３４２６２２５２０ｌ：ｌ：３８３５３

２５

３０

ｌ：ｌ：３

７９

３

∞加∞帥∞

０

１０

ＺＯ

３０

圖ｌ不同情況下最佳配方微球累積釋放率曲線圍一◆一ＰＨ＝ｌ２；一●—ＰＨ＝７４；一▲一ｐＨ＝７４（無(wú)ｓＬ）

由圖１可見(jiàn)，在有作為阻滯劑的硬脂酸存在的情

萬(wàn)

方數(shù)據(jù)Ｈｅｍｌｄ０ｆＭｅｄｉｃｉｎｅＶｏＬ２６Ｎｏ．１２Ｄｅｃｅｍｂｅｒ２００７

況下。利福平的釋放明顯減慢。這是由于利福平難溶于水，藥物大部分存在于硬脂酸所形成的乳滴中，當(dāng)載體與溶出介質(zhì)接觸時(shí)，由于脂溶性阻滯劑的存在，限制了藥物的釋放和擴(kuò)散速度，因此隨著硬脂酸用量增大，藥物釋放速度也逐漸減慢。

本實(shí)驗(yàn)利用靜電液滴法制備了口服利福平海藻酸鈉微球，平均粒徑７０２“ｍ，包封率８３．５％，在模擬胃液中釋放少，模擬腸液中釋放時(shí)問(wèn)長(zhǎng)、藥物釋放完全。此工藝簡(jiǎn)便、高效．條件溫和，化學(xué)污染少，生產(chǎn)周期短，可以推廣至抗結(jié)核藥物的改良，將有效提高結(jié)核病患者的藥物依從性，減少?gòu)?fù)發(fā)和耐藥的產(chǎn)生。

［參考文獻(xiàn)］

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