全蛋白提取組織裂解液配方

Western-Blot 全蛋白提取組織裂解液配方

1. 儲備液

10% Triton X-100

Triton X-100 蒸餾水

10ml 90ml

混合后37℃-40℃水浴中2-3hr，使其充分混勻

10% 去氧膽酸納

去氧膽酸納 蒸餾水 避光保存

200mmol/L PMSF(苯甲基磺酰氯)

PMSF

174.2mg 5ml

1g 10ml

異丙醇

分裝，-20℃保存

100mmol/L EDTA

EDTA

372.24mg 10ml

蒸餾水

1mg/mL亮抑酶肽(Leupeptin)

亮抑酶肽 蒸餾水

2mg 2ml

分裝，-20℃保存

1mg/mL 抑蛋白酶肽(Aprotinin)

抑蛋白酶肽 蒸餾水

2mg 2ml

分裝，-20℃保存

1mg/mL 胃蛋白酶抑制劑(Pepstatin)

胃蛋白酶抑制劑 甲醇

2mg 2ml

分裝，-20℃保存

2. 工作液

Tris-base (50mmol/L，pH 7.4)：

Tris-base NaCl

605mg 900mg 75ml

蒸餾水

用HCl調整pH值為7.4

10% Triton X-100 10% 去氧膽酸納 100mmol/L EDTA 用前加入：

1mg/mL亮抑酶肽 1mg/mL 抑蛋白酶肽

100?l 100?l 100?l 500?l

10mL 2.5mL 1mL

1mg/mL 胃蛋白酶抑制劑 200mmol/L PMSF

各成分的終濃度

Tris-base

50mmol/L，pH 7.4 1% 0.25% 150mmol/L 1 mmol/L 1?g/mL 1?g/mL 1?g/mL 1mmol/L

Triton X-100 去氧膽酸納 NaCl EDTA

亮抑酶肽

抑蛋白酶肽

胃蛋白酶抑制劑 PMSF

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