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核蛋白提取方法

時(shí)間:2021-11-05 19:35:10 資料 我要投稿

核蛋白提取方法

核蛋白提取試劑盒

產(chǎn)品組成:

產(chǎn)品組成 規(guī)格 提取液A 提取液B 蛋白酶抑制劑混合物 磷酸酶抑制劑混合物

BB-3102-1

50T 10ml 10ml 250ul 250ul

BB-3102-2 100T 20ml 20ml 500ul 500ul

儲(chǔ)存條件:

蛋白提取液,磷酸酶抑制劑2-8℃保存;蛋白酶抑制劑-20℃保存。

有效期:

一年。

產(chǎn)品簡介:

貝博核蛋白提取試劑盒提供配套試劑,適用于從各種原代或傳代細(xì)胞和各種實(shí)體組織,如腦、脊髓、神經(jīng)結(jié)或纖維、脂肪、肝臟、消化道、腎臟、心臟、肌肉、血管、結(jié)締組織等哺乳動(dòng)物組織中提取核蛋白和胞漿蛋白。提取過程簡單方便,可在1小時(shí)內(nèi)完成。制備的核蛋白和胞漿蛋白不僅純度高,保持天然活性,而且絕少交叉污染。提取的蛋白可用于Western Blotting、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、免疫共沉淀、酶活性測定等蛋白研究。

應(yīng)用示例:

1 2 3

圖片說明:用核蛋白提取試劑盒提取大腸組織樣本的SDA-PAGE的電泳考染照片和Western照片。圖1泳道中1、2、3分別為Marker、胞漿蛋白、核蛋白樣本。圖2為以上樣品的GAPDH內(nèi)參的WB結(jié)果照片。

使用方法:

細(xì)胞蛋白提取

1. 提取液制備:每200ul冷的蛋白提取液A和B中分別加入2ul蛋白酶抑制劑混

合物和磷酸酶抑制劑,混勻后置冰上備用。

2. 取5-10×106個(gè)細(xì)胞,在4℃,500×g條件下離心2-3分鐘,小心吸取培養(yǎng)基,

盡可能吸干,收集細(xì)胞。

3. 用冷PBS洗滌細(xì)胞兩次,每次洗滌后盡可能吸干上清。 4. 每20ul細(xì)胞壓積中加入200μl冷的提取液 A,高速渦旋振蕩15秒或吹打混勻,

置冰上15分鐘,中間每隔5分鐘渦旋振蕩或吹打混勻。

5. 再次高速渦旋振蕩5秒,然后在4℃,12000×g條件下離心5分鐘。

6. 快速將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管,即可得到胞漿蛋白,請置于冰上或-80

℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

7. 沉淀用PBS洗滌一次,然后在4℃,12000×g條件下離心5分鐘,棄上清。 8. 在沉淀中加入200μl冷的提取液B,高速渦旋振蕩15秒。 9. 置冰上40分鐘,每隔10分鐘高速渦旋振蕩15秒。 10. 在4℃,12000×g條件下離心10分鐘。

11. 快速將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管,即可得到核蛋白。

②③

12. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

組織蛋白提取

1. 提取液制備:每200ul冷的'蛋白提取液A和B中分別加入2ul蛋白酶抑制劑混

合物,混勻后置冰上備用。

2. 取適量組織樣本剪碎,加冷PBS,用組織勻漿器勻漿至無明顯肉眼可見固體(或

用液氮研磨),冰上靜置5分鐘,小心將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管。 3. 在4℃,500×g條件下離心2-3分鐘,棄上清。

4. 每20ul細(xì)胞壓積中加入200μl冷的提取液 A,高速渦旋振蕩15秒或吹打混勻,

置冰上15分鐘,中間每隔5分鐘渦旋振蕩或吹打混勻。。

5. 再次高速渦旋振蕩5秒,然后在4℃,12000×g條件下離心5分鐘。

6. 快速將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管,即可得到胞漿蛋白,請置于冰上或-80

℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

7. 沉淀用PBS洗滌一次,然后在4℃,12000×g條件下離心5分鐘,棄上清。 8. 在沉淀中加入200μl冷的提取液B,高速渦旋振蕩15秒。 9. 置冰上40分鐘,每隔10分鐘高速渦旋振蕩15秒。 10. 在4℃,12000×g條件下離心10分鐘。

11. 快速將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管,即可得到核蛋白。

②③

12. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

參考文獻(xiàn):

● Guang Yu, Tonghai Yan et al. Ser9 phosphorylation causes cytoplasmic detention of

I2PP2A/SET in Alzheimer disease

Neurobiology of Aging 2013 (IF=6.189)

● Xiaoling Ma et al. Staphylococcal Panton-Valentine Leukocidin Induces

Pro-Inflammatory Cytokine Production and Nuclear Factor-Kappa B Activation in Neutrophils PloS one 2012 (IF=4.411)

● Jinchun Qian et al. Ophiopogonin D prevents H2O2-induced injury in primary human umbilical vein endothelial cells

Journal of Ethnopharmacology 2010 Volume 128, Issue 2, Pages 438-445 (IF=2.466)

相關(guān)產(chǎn)品:

產(chǎn)品

總蛋白提取試劑盒 核蛋白提取試劑盒 Bradford蛋白定量試劑盒 ECL化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒 細(xì)胞蛋白提取試劑盒 組織蛋白提取試劑盒 細(xì)菌蛋白提取試劑盒 酵母蛋白提取試劑盒 磷酸化蛋白提取試劑盒 SDS-PAGE凝膠配制試劑盒

產(chǎn)品號 BB-3101 BB-3102 BB-3411 BB-3501 BB-3121 BB-3122 BB-3123 BB-3125 BB-3105 BB-3702

產(chǎn)品

磷酸化蛋白富集試劑盒 膜蛋白提取試劑盒 BCA蛋白定量試劑盒 蛋白Marker

細(xì)菌膜蛋白提取試劑盒 植物總蛋白提取試劑盒 植物膜蛋白提取試劑盒 蛋白酶抑制劑混合物 磷酸酶抑制劑混合物 SDS-PAGE上樣Buffer

產(chǎn)品號 BB-3108 BB-3103 BB-3401 BB-3721 BB-3151 BB-3124 BB-3152 BB-3301 BB-3311 BB-3703

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