植物組織蛋白質(zhì)提取方法

用200毫摩每升的tris-cl 和62.5毫摩每升的tris-cl,我們研究室一般用１００毫摩每升的tris-cl，pH 8.0 ．另外，最好加１５０毫摩每升的ＮaCl，用來分離以弱電荷結(jié)合到多糖上的蛋白。

2我提的蛋白難溶，請問怎么解決？1、請問這是為什么呢？怎么解決？2、溶解時是先在100℃沸水浴后在渦旋嗎？3、渦旋時產(chǎn)生大量泡沫，對蛋白有影響嗎？4、是在常溫溶解還是在4℃？或-20℃？5、一般溶解需要多長時間？怎樣才算溶解充分了？

我也是做植物葉片的，建議你可以用TCA-丙酮沉淀，方法如下：1、在液氮中研磨葉片30min，加PVP，和石英砂2、加入樣品體積3倍的提取液(丙酮溶液1)在-20℃的條件下過夜，然后離心（4℃10000rpm以上1小時）棄上清。3. 每份加入9ml丙酮溶液II，搗碎沉淀，常溫振動混勻，-20℃沉淀1h；10000rpm，4℃離心15min，棄上清.4. 每份加入9ml丙酮溶液II，常溫振動混勻，-20℃沉淀1h；10000rpm，4℃離心15min，棄上清.5. 每份加入9ml 80%丙酮溶液III, 常溫振動混勻，-20℃沉淀1h, 10000rpm，4℃離心15min，棄上清6．干燥成硬塊，磨成粉磨-20℃保存待用。

第二個問題：37度水浴

第三個問題：渦旋時產(chǎn)生大量泡沫，沒有影響第四個問題：37度溶解

第五個問題1個小時，中間混勻數(shù)次

出現(xiàn)這種情況是很正常的，要是全部都溶了倒是不太正常。用沉淀法濃縮蛋白都存在一個變性的問題，在具體的操作過程中，有一部分蛋白變性了，所以會不溶解。操作的時候盡量保持低溫！溶解的時候可以在常溫下，蛋白變成粉末后，立即加1*SDS上樣緩沖液，用加樣器吹打，大約5分鐘就好，可以用來進(jìn)行下一步的實驗了。也可以在4度溶解過夜。渦旋時產(chǎn)生大量泡沫，個人認(rèn)為影響不大一般溶解半個小時就很充分了，但仍會有很多不溶物！可以離心棄掉！ 丙酮沉淀之后要干燥，這個過程一定不要時間太長，不然樣品干燥得過了，就很難溶了。即使你加上了硫脲，高濃度尿素也不行。我的經(jīng)驗是只要半個小時左右就足夠了，表面上看上去比較干就可以了。

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