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人類(lèi)GAD67基因擴(kuò)增及pEGFP-C2-GAD67真核表達(dá)載體的構(gòu)建
目的 擴(kuò)增人類(lèi)谷氨酸脫羧酶(GAD)67基因,并構(gòu)建pEGFP-C2-GAD67真核表達(dá)載體.方法 應(yīng)用基因重組技術(shù),采用反轉(zhuǎn)錄PCR方法對(duì)來(lái)自人類(lèi)腦組織cDNA中編碼GAD67的基因片段進(jìn)行擴(kuò)增,插入PUC57克隆載體,經(jīng)Xho Ⅰ和BamH Ⅰ雙酶切出GAD67基因片段,再克隆入真核表達(dá)載體pEGFP-C2后構(gòu)建pEGFP-C2-GAD67重組載體,經(jīng)PCR擴(kuò)增、酶切后測(cè)序鑒定. 結(jié)果 人類(lèi)GAD67基因擴(kuò)增產(chǎn)物大小為1 785 bp,編碼594個(gè)氨基酸殘基.重組真核表達(dá)載體經(jīng)酶切鑒定表明為正確重組子,PCR正確擴(kuò)增出目的條帶.與GenBank中人類(lèi)GAD67基因序列比較,核苷酸和氨基酸水平的同源性分別達(dá)99.78%和99.66%. 結(jié)論 人類(lèi)GAD67基因克隆后,可成功構(gòu)建真核表達(dá)載體pEGFP-C2-GAD67,為進(jìn)一步該基因轉(zhuǎn)染神經(jīng)干細(xì)胞移植治療癲癇提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ).
作 者： 劉智良 馬宏偉 姚志彬 徐如祥 張世忠 王嬈 LIU Zhi-liang MA Hong-wei YAO Zhi-bin XU Ru-xiang ZHANG Shi-zhong WANG Rao 作者單位： 劉智良,姚志彬,LIU Zhi-liang,YAO Zhi-bin(510275,廣州,中山大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院博士后流動(dòng)站)馬宏偉,徐如祥,張世忠,王嬈,MA Hong-wei,XU Ru-xiang,ZHANG Shi-zhong,WANG Rao(510282,廣州,南方醫(yī)科大學(xué)珠江醫(yī)院神經(jīng)外科)
刊 名： 中華神經(jīng)醫(yī)學(xué)雜志 ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF NEUROMEDICINE 年，卷(期)： 2006 5(11) 分類(lèi)號(hào)： Q3 關(guān)鍵詞： 谷氨酸脫羧酶(GAD)67 克隆 真核表達(dá)質(zhì)粒【人類(lèi)GAD67基因擴(kuò)增及pEGFP-C2-GAD67真核表達(dá)載體的構(gòu)建】相關(guān)文章：
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