杜氏鹽藻硝酸鹽還原酶基因5′上游序列的克隆與功能分析

目的: 克隆杜氏鹽藻硝酸鹽還原酶(NR)基因5′上游序列,并對其功能進行分析.方法: 利用BamHI、EcoRI、HindⅢ、PstⅠ、SalⅠ、Xbal 6種限制性內(nèi)切酶分別酶切鹽藻基因組DNA,并與接頭連接,構(gòu)建成鹽藻基因組步行文庫.采用LA-PCR方法,從上述鹽藻步行基因組文庫中擴增NR基因5′上游序列,測序并進行分析.為檢測其表達特性,構(gòu)建了該片段與GUS嵌合基因的表達載體pNR-GUS,通過電擊法將所構(gòu)建的重組表達載體轉(zhuǎn)化鹽藻,組織化學染色法觀察GUS的表達.結(jié)果: 從鹽藻基因組步行文庫中擴增出約1200bp特異片段,序列分析表明5′上游序列含有啟動子的特征性序列.GUS瞬時表達染色結(jié)果顯示,該DNA片段具有硝酸鹽誘導和銨抑制的啟動子活性.結(jié)論: 所克隆的鹽藻的5′上游序列可能是一種具有"開關(guān)"活性的可控性啟動子.

作 者： 李杰 賈巖龍 閆紅霞 潘衛(wèi)東 薛樂勛 LI Jie JIA Yan-long YAN Hong-xia PAN Wei-dong XUE Le-xun   作者單位： 鄭州大學細胞生物學研究室,鄭州大學第一附屬醫(yī)院,鄭州,450052  刊 名： 中國生物工程雜志  ISTIC PKU 英文刊名： CHINA BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2006 26(11)  分類號： Q94  關(guān)鍵詞： 杜氏鹽藻   硝酸鹽還原酶基因   5′上游序列   功能  

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