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在畢赤酵母中表達(dá)人溶菌酶蛋白的研究
將化學(xué)合成的人溶茵酶基因艦hLYZ(444 bp)構(gòu)建到畢赤酵母分泌型表達(dá)載體pPICZ上;載體質(zhì)粒用Sac I線性化后電擊法轉(zhuǎn)化畢赤酵母菌株GS115.在舍Zeocin的抗性培養(yǎng)基篩選后PCR鑒定獲得了9株重組菌株.重組菌株經(jīng)甲醇誘導(dǎo)后取表達(dá)上清液進(jìn)行SDS-PAGE電泳和Western blot分析.結(jié)果顯示,重組hLYZ在畢赤酵母中成功表達(dá),在誘導(dǎo)60 h時表達(dá)量最高.用鎳親和層析柱純化重組hLYZ,用Bradford法測得其含量約為324 mg·L-1.比濁法活性測定結(jié)果顯示所表達(dá)的重組人溶茵酶活性達(dá)到4473 U.mL-1.本研究利用畢赤酵母分泌型表達(dá)載體成功表達(dá)了重組人溶菌酶,并探索了簡單有效的純化和活性測定方法,為利用畢赤酵母系統(tǒng)規(guī);a(chǎn)重組人溶菌酶奠定了技術(shù)基礎(chǔ).
作 者: 胡喬 趙凌俠 唐克軒 HU Qiao ZHAO Ling-xia TANG Ke-xuan 作者單位: 胡喬,HU Qiao(上海交通大學(xué),農(nóng)業(yè)與生物學(xué)院,上海,200240;上海交通大學(xué),生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院,上海,200240)趙凌俠,唐克軒,ZHAO Ling-xia,TANG Ke-xuan(上海交通大學(xué),農(nóng)業(yè)與生物學(xué)院,上海,200240)
刊 名: 上海交通大學(xué)學(xué)報(農(nóng)業(yè)科學(xué)版) ISTIC 英文刊名: JOURNAL OF SHANGHAI JIAOTONG UNIVERSITY(AGRICULTURAL SCIENCE) 年,卷(期): 2008 26(3) 分類號: Q786 關(guān)鍵詞: 人溶菌酶 畢赤酵母 生物活性【在畢赤酵母中表達(dá)人溶菌酶蛋白的研究】相關(guān)文章:
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