大鼠對氧磷酶1真核表達(dá)載體的構(gòu)建及在體外的表達(dá)

目的 構(gòu)建大鼠對氧磷酶1(paraoxonase 1,PON1)真核表達(dá)載體,并檢測其在體外培養(yǎng)細(xì)胞中的表達(dá)及功能,為進(jìn)一步探索運(yùn)用其進(jìn)行基因防治肺部感染奠定基礎(chǔ).方法 利用RT-PCR擴(kuò)增大鼠PON1編碼區(qū)全長序列,克隆入pcDNA 3.1(+),鑒定無誤后,脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞及293細(xì)胞, Western印跡檢測蛋白表達(dá),并檢測其芳香酯酶活性及對銅綠假單胞菌密度感知系統(tǒng)信號分子N-�；�高絲氨酸內(nèi)酯(N-acylhomoserine lactones,AHLs)的水解功能.結(jié)果 分別從大鼠肝組織中擴(kuò)增出1 153 bp片段,克隆入表達(dá)載體后進(jìn)行酶切鑒定和測序結(jié)果正確.轉(zhuǎn)染細(xì)胞后能夠表達(dá)目的 蛋白,該蛋白具有芳香酯酶和AHLs內(nèi)酯酶活性.結(jié)論 成功構(gòu)建了含有大鼠PON1真核表達(dá)載體,質(zhì)粒能夠在真核細(xì)胞中表達(dá),能夠有效地水解銅綠假單胞菌密度感知系統(tǒng)信號分子.

作 者： 楊碩 熊盛道 熊維寧 許淑云 史雪梅 徐國鵬 蘭芬 陸小霞 胡瓊潔 YANG Shuo XIONG Shengdao XIONG Weining XU Shuyun SHI Xuemei XU Guopeng LAN Fen LU Xiaoxia HU Qiongjie   作者單位： 華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院呼吸內(nèi)科,衛(wèi)生部呼吸病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,武漢市,430030  刊 名： 醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)雜志  ISTIC 英文刊名： JOURNAL OF MEDICAL MOLECULAR BIOLOGY  年，卷(期)： 2008 5(3)  分類號： Q784  關(guān)鍵詞： 銅綠假單胞菌   對氧磷酶   密度感知   基因的表達(dá)與調(diào)控  

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