應用PCR-酶切連接法合成全長sFat1基因

人工合成基因在生命科學研究中有著重要的意義,因此基因合成是一項常用技術.長片段基因的合成比較困難,常常因為合成中堿基序列的錯配、突變等原因而導致失敗.研究者們所熟知的幾種現行的方法仍然難以解決該問題.本研究在作者自身的工作經驗中建立了一種新的基因合成方法,即PCR-酶切連接法.應用該方法成功地將化學合成的27個寡聚核苷酸片段(每個片段長60～68 bp)拼接組裝起來,獲得了完整的總長為1 226 bp的基因sFat-1.整個過程僅采用3輪PCR(共7個反應)、2輪的酶切連接(3個反應),而且未曾出現任何偏離預期基因序列的差錯.該方法步驟較少,技術簡單,出錯極少,是合成長基因序列很好的選擇.

作 者： 朱貴明 陳宏 盧建申 周艷榮 吳曉潔 陳紅星 鄧繼先 ZHU Gui-Ming CHEN Hong LU Jian-Shen ZHOU Yan-Rong WU Xiao-Jie CHEN Hong-Xing DENG Ji-Xian   作者單位： 朱貴明,ZHU Gui-Ming(西北農林科技大學動物科技學院,楊凌,712100;軍事醫(yī)學科學院生物工程研究所,北京,100071)

陳宏,CHEN Hong(西北農林科技大學動物科技學院,楊凌,712100;徐州師范大學細胞與分子生物學研究所,徐州,221116)

盧建申,周艷榮,吳曉潔,陳紅星,鄧繼先,LU Jian-Shen,ZHOU Yan-Rong,WU Xiao-Jie,CHEN Hong-Xing,DENG Ji-Xian(軍事醫(yī)學科學院生物工程研究所,北京,100071) 

刊 名： 遺傳  ISTIC PKU 英文刊名： HEREDITAS(BEIJING)  年，卷(期)： 2006 28(9)  分類號： Q75  關鍵詞： 基因合成   聚合酶鏈式反應   ω-3脂肪酸去飽和酶基因  

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