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嗜鉻顆粒蛋白A基因的反義轉(zhuǎn)基因小鼠模型的建立及該基因啟動(dòng)子的組織特異性
構(gòu)建小鼠嗜鉻顆粒蛋白A（Chromogranin A，CGA）基因的反義DNA載體pGAS1C-lacZ。用電穿孔的方法將該載體轉(zhuǎn)化大鼠腎上腺髓質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞系PC-12，X-Gal染色后證明位于CGA基因啟動(dòng)子下游的報(bào)告基因lacZ已經(jīng)表達(dá)。用限制性內(nèi)切酶除去載體的質(zhì)粒骨架后，顯微注射入供體昆明小鼠的受精卵中，隨后將注射過(guò)DNA的受精卵移植入假母的輸卵管中，完成正常的胚胎發(fā)育。用PCR的方法篩選假母產(chǎn)下的小鼠，得到CGA基因反義RNA轉(zhuǎn)基因首建鼠14只。將首建鼠分別與正常昆明鼠交配，產(chǎn)生后代。取首建鼠的腎上腺進(jìn)行X-Gal染色，組織用于石蠟切片，根據(jù)各鼠腎上腺切片的藍(lán)色深淺判定轉(zhuǎn)入基因表達(dá)量的高低，篩選到兩只表達(dá)量高的首建鼠，留下它們的后代。取轉(zhuǎn)基因鼠的各種組織用于X-Gal染色，發(fā)現(xiàn)報(bào)告基因在腎上腺、胰腺的胰島中有表達(dá)，而在肌肉、脂肪組織中無(wú)表達(dá)，說(shuō)明CGA基因的啟動(dòng)子具有神經(jīng)內(nèi)分泌組織特異性。
作 者： 孫紫清 吳鶴齡 SUN Zi-Qing WU He-Ling 作者單位： 北京大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院, 刊 名： 遺傳學(xué)報(bào) ISTIC SCI PKU 英文刊名： ACTA CENETICA SINICA 年，卷(期)： 2001 28(5) 分類號(hào)： Q754 關(guān)鍵詞： 嗜鉻顆粒蛋白A基因 反義RNA【嗜鉻顆粒蛋白A基因的反義轉(zhuǎn)基因小鼠模型的建立及該基因啟動(dòng)子的組織特異性】相關(guān)文章：
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