全合成人源性噬菌體抗體庫的構建

目的:構建全合成人源性噬菌體抗體庫.方法:選擇部分使用頻率較高的人抗體胚系基因家族的框架區(qū)基因進行人工合成,同時人工設計合成半隨機CDR3,通過重疊拼接延伸PCR的方法合成抗體基因.然后利用限制性內(nèi)切酶SfiⅠ、NotⅠ分別雙酶切抗體基因和噬菌體展示載體.連接后的重組噬粒通過電擊轉(zhuǎn)化的方法轉(zhuǎn)入大腸桿菌TG1,構建抗體庫.結(jié)果與結(jié)論:PCR結(jié)果顯示,通過優(yōu)化后的方法能在保證抗體庫多樣性的前提下,高效地獲得抗體基因.經(jīng)過數(shù)十次電擊轉(zhuǎn)化構建了庫容量為2×109的全合成抗體庫,菌落PCR、測序及篩選結(jié)果表明,抗體庫質(zhì)量優(yōu)良,為篩選人源性治療抗體奠定了基礎.

作 者： 杜威世 王雙 孫志偉 俞煒源 DU Wei-Shi WANG-Shuang SUN Zhi-Wei YU Wei-Yuan   作者單位： 軍事醫(yī)學科學院生物工程研究所,北京,100071  刊 名： 軍事醫(yī)學科學院院刊  ISTIC PKU 英文刊名： BULLETIN OF THE ACADEMY OF MILITARY MEDICAL SCIENCES  年，卷(期)： 2006 30(4)  分類號： Q782  關鍵詞： 噬菌體展示   全合成抗體庫   單鏈抗體  

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