人載脂蛋白A-Ⅰ的原核表達(dá)及二級結(jié)構(gòu)和功能鑒定

目的為獲得高產(chǎn)量并具有正常結(jié)構(gòu)和生物學(xué)活性的原核表達(dá)人載脂蛋白A-Ⅰ(apoA-Ⅰ).方法利用DNA重組技術(shù)對人apoA-Ⅰ的前8個氨基酸引入沉默突變,以pET-30b(+)為原核表達(dá)載體,在apoA-Ⅰ多肽鏈C-末端引入6×組氨酸標(biāo)簽,采用鎳親和層析對表達(dá)蛋白進(jìn)行純化.分別使用圓二色分析、濁度澄清試驗(yàn)和膽固醇外流試驗(yàn)對重組apoA-Ⅰ的α螺旋含量、脂質(zhì)結(jié)合動力學(xué)及促細(xì)胞膽固醇外流能力進(jìn)行評價.結(jié)果獲得高表達(dá)產(chǎn)量的重組apoA-Ⅰ(12 mg純化apoA-Ⅰ蛋白/L菌液);重組蛋白的α螺旋含量為(54±4)%,脂質(zhì)結(jié)合動力學(xué)速率常數(shù)k1/2為0.059±0.002 min-1,膽固醇外流百分比為(16.68±1.77)%.結(jié)論可獲得高產(chǎn)量并具有生物學(xué)活性的重組人apoA-Ⅰ;為構(gòu)建apoA-Ⅰ其他突變體提供模式.

作 者： 祝學(xué)衛(wèi) 吳鋼 曾武威 薛紅 陳保生 ZHU Xue-wei WU Gang ZENG Wu-wei XUE Hong CHEN Bao-sheng   作者單位： 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院,中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué),基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所,醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,北京,100005  刊 名： 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床  ISTIC PKU 英文刊名： BASIC & CLINICAL MEDICINE  年，卷(期)： 2006 26(4)  分類號： Q816  關(guān)鍵詞： 人載脂蛋白A-Ⅰ   原核表達(dá)   α螺旋含量   脂質(zhì)結(jié)合   細(xì)胞膽固醇外流  

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