一種改良的啟動子序列克隆的染色體步查法

利用染色體步行法,從已知DNA序列克隆側(cè)翼未知序列是非常有效的方法之一,但由于所選用的特定限制性內(nèi)切酶對目標基因組不能酶解成合適大小的片段,因而受PCR擴增能力的局限,往往擴增不出有效產(chǎn)物.針對這一點,這里我們介紹一種簡單有效的改良方法,它包括以下步驟:首先用不同的限制性內(nèi)切酶(包括平末端和粘性末端)酶解目標基因組DNA,接著,選擇能將基因組酶切成彌散、分布均勻的限制性內(nèi)切酶,如Dra Ⅰ和Hind Ⅲ,合成相對應的接頭;然后,選擇彌散的、分布均勻的限制性內(nèi)切酶的酶解產(chǎn)物,構(gòu)建成含相應接頭的基因組DNA文庫,用作PCR的模板;最后,用接頭引物和特異引物,通過巢式PCR擴增目的片段,獲得了理想的擴增效果.采用改進后的染色體步查法,有效地從較復雜的棉花核DNA中克隆出6個棉花啟動子序列.

作 者： 吳藹民 劉進元 WU Ai-Min LIU Jin-Yuan   作者單位： 清華大學生物科學與技術系分子生物學實驗室,北京,100084  刊 名： 中國生物化學與分子生物學報  ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY  年，卷(期)： 2006 22(3)  分類號： Q7  關鍵詞： 連接介導的步查法   限制性內(nèi)切酶   棉花   啟動子序列   方法改良  

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