日本沼蝦基因片段PCR擴(kuò)增的條件優(yōu)化

以日本沼蝦肌肉組織為材料,提取其基因組DNA,研究了該蝦16S rRNA基因片段擴(kuò)增的PCR反應(yīng)條件.經(jīng)對(duì)擴(kuò)增反應(yīng)體系中各因子和擴(kuò)增程序的梯度實(shí)驗(yàn),確定優(yōu)化反應(yīng)條件為:在25 μL反應(yīng)體系中,10×Buffer 2.5μL,DNA模板200～300 ng,4×dNTP 0.2 mmol/L,Mg2+1.5 mmol/L,引物0.4 μmol/L,Taq DNA聚合酶1 U,95℃預(yù)變性5 min;接著35個(gè)循環(huán)包括95℃變性1 min,56 ℃復(fù)性50 s,72℃延伸1 min;最后72℃延伸10 min.應(yīng)用此優(yōu)化體系擴(kuò)增日本沼蝦18S rRNA,細(xì)胞色素氧化酶亞基Ⅰ(cytochrome oxidase subunit I,COI),NADH脫氫酶亞基V(NADH dehydrogenase subunit 5,ND5)等基因片段均獲得了穩(wěn)定而理想的效果.研究結(jié)果為深入探討日本沼蝦種群的遺傳和變異,以及開展其種質(zhì)鑒定和分子標(biāo)記等研究提供了參考.

作 者： 趙曉勤 倪娟 陳立僑 顧志敏 周志明 ZHAO Xiao-qin NI Juan CHEN Li-qiao GU Zhi-min ZHOU Zhi-ming   作者單位： 趙曉勤,倪娟,陳立僑,ZHAO Xiao-qin,NI Juan,CHEN Li-qiao(華東師范大學(xué),生命科學(xué)學(xué)院,上海,200062)

顧志敏,周志明,GU Zhi-min,ZHOU Zhi-ming(浙江省淡水水產(chǎn)研究所,浙江,313001) 

刊 名： 華東師范大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版）  ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF EAST CHINA NORMAL UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE)  年，卷(期)： 2006 ""(2)  分類號(hào)： Q503  關(guān)鍵詞： 日本沼蝦   PCR   優(yōu)化  

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