HSF1基因敲除小鼠胚胎成纖維細胞的永生化

目的:建立HSF1-/-,HSF1+/+兩種基因型小鼠胚胎成纖維永生化細胞系,為HSF1的功能研究提供實驗模型.方法:用脂質體介導的基因轉染法將pSV3neo質粒導入HSF1-/-,HSF1+/+兩種基因型小鼠胚胎成纖維細胞,經(jīng)G418篩選,抗性克隆擴大培養(yǎng),建立永生化細胞系;用PCR檢測兩種細胞株中目的基因的整合,用RT-PCR法鑒定SV40 T基因在轉染細胞中的表達;用Western blot檢測所建細胞株的誘導型熱休克蛋白70的表達情況.結果:有3個細胞克隆已擴大培養(yǎng)穩(wěn)定傳代達6個月,經(jīng)鑒定SV40 T抗原已整合到兩種細胞中且穩(wěn)定表達, HSF1-/-胚胎成纖維細胞熱休克蛋白70的誘導表達消失.結論:成功建立永生化HSF1-/-,HSF1+/+兩種基因型小鼠胚胎成纖維細胞.

作 者： 劉梅冬 張華莉 龔環(huán)宇 陳廣文 王慷慨 鄂順梅 肖獻忠 LIU Mei-dong ZHANG Hua-li GONG Huan-yu CHEN Guang-wen WANG Kang-kai E Shun-mei XIAO Xian-zhong   作者單位： 劉梅冬,張華莉,陳廣文,王慷慨,鄂順梅,肖獻忠,LIU Mei-dong,ZHANG Hua-li,CHEN Guang-wen,WANG Kang-kai,E Shun-mei,XIAO Xian-zhong(中南大學,湘雅醫(yī)學院病理生理學教研室,長沙,410078)

龔環(huán)宇,GONG Huan-yu(中南大學,湘雅三醫(yī)院,長沙,410013) 

刊 名： 中南大學學報（醫(yī)學版）  ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF CENTRAL SOUTH UNIVERSITY (MEDICAL SCIENCES)  年，卷(期)： 2006 31(2)  分類號： Q813.2  關鍵詞： HSF1   基因敲除   胚胎成纖維細胞   永生化   SV40T抗原  

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