豬傳染性胃腸炎病毒纖突糖蛋白在畢赤酵母中的分泌表達(dá)

目的:利用巴斯德畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)纖突糖蛋白S.方法:根據(jù)GenBank中豬TGEV纖突耱蛋白S全基因設(shè)計(jì)一對(duì)引物,并在5'引物和3'引物中引入EcoR Ⅰ、Not Ⅰ酶切位點(diǎn),2.2 kb的目的基因S經(jīng)PCR擴(kuò)增后克隆于pBS-T載體,再將S基因經(jīng)雙酶切從T載體切下并與穿梭質(zhì)粒pPIC9k連接,Sal Ⅰ線性化重組穿梭質(zhì)粒pPIC9k-S,電轉(zhuǎn)化于畢赤酵母GS115感受態(tài)細(xì)胞,G418篩選鑒定陽(yáng)性重組子,經(jīng)甲醇誘導(dǎo),SDSPAGE檢測(cè)誘導(dǎo)后上清.結(jié)果:對(duì)pPIC9k-S重組酵母表達(dá)載體的測(cè)序證實(shí)巳成功克隆了豬TGEV S基因;重組酵母菌誘導(dǎo)表達(dá)后,SDS-PAGE檢測(cè)結(jié)果顯示表達(dá)產(chǎn)物的相對(duì)分子質(zhì)量的為82×103,且S蛋白以可溶性形式分泌表達(dá)于胞外.結(jié)論:利用巴斯德畢赤酵母真核表達(dá)系統(tǒng)成功表達(dá)了豬傳染性胃腸炎病毒(河北分離株)纖突糖蛋白S.

作 者： 康雪燕 張莉 姜世金 張培君 KANG Xue-Yan ZHANG Li JIANG Shi-Jin Zhang Pei-Jun   作者單位： 康雪燕,姜世金,KANG Xue-Yan,JIANG Shi-Jin(山東農(nóng)業(yè)大學(xué),動(dòng)物醫(yī)學(xué)院,山東,泰安,271018)

張莉,張培君,ZHANG Li,Zhang Pei-Jun(北京市農(nóng)林科學(xué)院,畜牧獸醫(yī)研究所,北京,100097) 

刊 名： 生物技術(shù)通訊  ISTIC 英文刊名： LETTERS IN BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2010 21(2)  分類號(hào)： Q78  關(guān)鍵詞： 豬傳染性胃腸炎病毒   纖突糖蛋白   巴斯德畢赤酵母   分泌表達(dá)  

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