糞便中腸球菌SYBR GreenI熒光定量PCR檢測方法的建立

目的 利用SYBR GreenI熒光定量PCR方法,建立腸球菌實時熒光PCR檢測方法,并初步應用于糞便中腸球菌的檢測.方法 根據(jù)GenBank發(fā)表的腸球菌23S rRNA基因序列的保守區(qū)域設(shè)計合成特異性的引物;利用構(gòu)建的質(zhì)粒標準品繪制兩種標準曲線,構(gòu)建基因拷貝數(shù)、細菌數(shù)為分析指標的定量分析模型并初步應用于糞便標本的檢測分析.結(jié)果 所建立的SYBR GreenI熒光定量PCR方法檢測靈敏度可達7個拷貝數(shù)/reaction.糞便樣本根據(jù)實時熒光定量PCR方法所得的理論數(shù)值與培養(yǎng)菌值之間差異無顯著性(P＞0.05).非炎性腹瀉標本中菌數(shù)與健康成人標本中菌數(shù)差異無顯著性(P＞0.05).靈敏度曲線所得的數(shù)值大于菌數(shù)標準曲線,可能由于DNA提取過程中存在部分的損失.檢測糞便標本結(jié)果顯示SYBR GreenI熒光定量PCR方法較平板計數(shù)法敏感、快捷、簡便.結(jié)論 本研究建立了一種靈敏、特異、簡便易行的腸球菌定量檢測方法.

作 者： 任月 袁杰利 盧行安 曹滌菲 蔡竹 REN Yue YUAN Jie-li LU Xing-an CAO Di-fei CAI Zu   作者單位： 任月,REN Yue(大連醫(yī)科大學,遼寧,大連,116027)

袁杰利,YUAN Jie-li(大連醫(yī)科大學,微生態(tài)學教研室,遼寧,大連,116027)

盧行安,LU Xing-an(遼寧出入境檢驗檢疫局,遼寧,大連,116001)

曹滌菲,CAO Di-fei(黑龍江八一農(nóng)墾大學,黑龍江,大慶,163319)

蔡竹,CAI Zu(大連醫(yī)科大學,組織人事部,遼寧,大連,116027) 

刊 名： 中國微生態(tài)學雜志  ISTIC 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF MICROECOLOGY  年，卷(期)： 2007 19(6)  分類號： Q378.992  關(guān)鍵詞： 腸球菌   熒光定量PCR   糞便  

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