鰱(Hypophthalmichthys molitrix)IL-10基因的克隆及表達(dá)分析

白細(xì)胞介素10(IL-10)是一種作用廣泛的抗炎細(xì)胞因子,主要功能是限制和最終終止炎癥反應(yīng).用RACE(rapid amplification of cDNA ends)-PCR方法擴(kuò)增出鰱白細(xì)胞介素10(IL-10)的cDNA,其全長為1248nt,包含5'非編碼區(qū)156nt,3'非編碼區(qū)552nt,開放閱讀框540nt.鰱IL-10的開放閱讀框編碼179個(gè)氨基酸,其中包含構(gòu)成兩對(duì)二硫鍵的4個(gè)保守半胱氨酸.RT-PCR結(jié)果顯示鰱IL-10mRNA主要在脾臟、鰓、頭腎和肌肉中表達(dá).將鰱IL-10完整開放閱讀框克隆到原核融合表達(dá)載體pET-32a-c(+)上,轉(zhuǎn)入大腸桿菌Rosetta-gami(DE3)內(nèi)進(jìn)行表達(dá),經(jīng)SDS-PAGE電泳后顯示重組融合蛋白在分子量約39 ku處有明顯表達(dá)帶,與預(yù)期分子量大小一致,且主要以不可溶的包涵體形式存在.變性條件下利用His·Bind樹脂成功純化了融合蛋白,將其免疫家兔,獲得兔多克隆抗鰱IL-10抗體,Western blot檢測(cè)到兔多克隆抗鰱IL-10抗體可有效地與重組蛋白結(jié)合.這些結(jié)果為進(jìn)一步研究IL-10的功能奠定了基礎(chǔ).

作 者： 肖凡書 昌鳴先 孫軍 肖調(diào)義 聶品   作者單位： 肖凡書(湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院,長沙,410128;中國科學(xué)院水生生物研究所,淡水生態(tài)與生物技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,武漢,430072)

昌鳴先,聶品(中國科學(xué)院水生生物研究所,淡水生態(tài)與生物技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,武漢,430072)

孫軍(暨南大學(xué)水生生物研究所,廣州,510632)

肖調(diào)義(湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院,長沙,410128) 

刊 名： 自然科學(xué)進(jìn)展  ISTIC PKU 英文刊名： PROGRESS IN NATURAL SCIENCE  年，卷(期)： 2006 16(2)  分類號(hào)： Q95  關(guān)鍵詞： 鰱   IL-10   克隆   組織表達(dá)   原核表達(dá)  

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