含2A片段的重組黃熱病毒17D疫苗表達(dá)載體的構(gòu)建

黃熱疫苗是一種減毒的黃熱病毒17D(YF-17D)活疫苗,是現(xiàn)有疫苗中最安全、最有效的疫苗之一,適于發(fā)展為疫苗載體.用RT-PCR法擴(kuò)增出覆蓋YF-17D全長基因組的3個(gè)cDNA片段:5'cDNA(A)、3'cDNA(B)和中間cDNA(C),同時(shí)引入SP6增強(qiáng)子序列、酶切位點(diǎn)和重復(fù)序列.順序?qū)�A和B同E.coli-yeast穿梭質(zhì)粒pRS424連接,再與C共轉(zhuǎn)染酵母菌,利用缺少色氨酸和尿嘧啶的選擇性固體培養(yǎng)基篩選出含YF-17D全長基因組的cDNA質(zhì)粒.以該質(zhì)粒為模板,經(jīng)過DNA重組和酵母同源重組,獲得含有口蹄疫病毒蛋白水解酶2A片段的重組YF-17D表達(dá)載體.將該表達(dá)載體體外轉(zhuǎn)錄后,電擊轉(zhuǎn)染BHK-21細(xì)胞.間接免疫熒光檢測結(jié)果表明,RNA轉(zhuǎn)錄體在BHK-21細(xì)胞中進(jìn)行了穩(wěn)定的表達(dá);滴度測定與形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果表明,重組病毒在細(xì)胞中的生長曲線等特征同母本YF-17D十分相似.結(jié)果提示,利用酵母菌同源重組在2A部位引入異種抗原基因,重組YF-17D表達(dá)載體pRS-YF-2A1具有成為高效活疫苗表達(dá)載體的潛力.

作 者： Xiaowu Pang 付文川 郭銀漢 張立樹 謝天培 Xinbin Gu Xiaowu Pang FU Wen-Chuan GUO Yin-Han ZHANG Li-Shu XIE Tian-Pei Xinbin Gu   作者單位： Xiaowu Pang,郭銀漢,張立樹,謝天培,Xiaowu Pang,GUO Yin-Han,ZHANG Li-Shu,XIE Tian-Pei(北京東方天甲科技發(fā)展有限公司,北京,100078)

付文川,FU Wen-Chuan(天甲麗珠生物科技有限公司,香港)

Xinbin Gu,Xinbin Gu(霍華德大學(xué)醫(yī)學(xué)院,華盛頓,20059,美國) 

刊 名： 生物工程學(xué)報(bào)  ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2006 22(3)  分類號： Q785  關(guān)鍵詞： 黃熱病毒17D   表達(dá)載體   2A片段   全長cDNA   同源重組  

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