可溶性三聚化CD40-異亮氨酸拉鏈融合蛋白的制備及鑒定

以克隆的CD40 cDNA為模板,經(jīng)多步PCR構(gòu)建羧基端融合異亮氨酸拉鏈(isoleucine zipper,IZ)三聚化基序和His6標(biāo)簽的可溶性CD40融合蛋白(sCD40IZ)的原核表達(dá)載體,在大腸桿菌中獲得高效表達(dá),分子量為27kD,與理論大小相符,表達(dá)產(chǎn)物主要存在于包涵體中,對(duì)包涵體蛋白進(jìn)行稀釋復(fù)性和純化得到可溶性的sCD40IZ重組蛋白,該蛋白在溶液中的分子量為91kD,表明最有可能以三聚體形式存在.活性分析顯示該蛋白能夠與細(xì)胞上的CD40L結(jié)合,并且其結(jié)合活性與不含IZ基序的可溶性CD40相比明顯提高.這些結(jié)果表明,在可溶性CD40羧基端融合IZ基序能夠促進(jìn)形成三聚體,并且具有增強(qiáng)的配基結(jié)合活性.

作 者： 徐麗慧 劉毅 何賢輝 XU Li-Hui LIU Yi HE Xian-Hui   作者單位： 徐麗慧,XU Li-Hui(暨南大學(xué)組織移植與免疫教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣州,510632;暨南大學(xué)生物工程研究所,廣州,510632)

劉毅,何賢輝,LIU Yi,HE Xian-Hui(暨南大學(xué)組織移植與免疫教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣州,510632) 

刊 名： 生物工程學(xué)報(bào)  ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2006 22(3)  分類號(hào)： Q78 R392.12  關(guān)鍵詞： CD40   三聚化   異亮氨酸拉鏈   原核表達(dá)   包涵體   復(fù)性  

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