嗜肺軍團(tuán)菌lvgA基因的克隆及其在大腸桿菌中的表達(dá)

本實(shí)驗(yàn)采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)從嗜肺軍團(tuán)菌基因組DNA中擴(kuò)增得到軍團(tuán)菌毒力基因(Legionella virulence gene,lvg A gene),并將其定向連接入克隆載體pUC18,構(gòu)建重組質(zhì)粒pUlvgA,重組子經(jīng)限制性?xún)?nèi)切酶分析、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)及測(cè)序鑒定后,再將lvgA基因亞克隆至原核表達(dá)載體pGEX-4T-1,構(gòu)建原核表達(dá)重組質(zhì)粒pGlvgA,轉(zhuǎn)化宿主菌JM109,IPTG誘導(dǎo)表達(dá),產(chǎn)物進(jìn)行SDS-PAGE電泳、免疫印記分析鑒定.實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,成功擴(kuò)增出627 bp的lvgA基因,構(gòu)建了重組質(zhì)粒pUlvgA及原核表達(dá)重組質(zhì)粒pGlvgA,并使53.7 KDa 的GST-lvgA融合蛋白質(zhì)在原核系統(tǒng)中得到了有效的表達(dá).

作 者： 劉明杰 陳建平 廖濤 蘆殿香 陳憲 Liu Mingjie Chen Jianping Liao Tao Lu Dianxiang Chen Xian   作者單位： 四川大學(xué),華西基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與法醫(yī)學(xué)院,寄生蟲(chóng)學(xué)教研室,形態(tài)學(xué)實(shí)驗(yàn)室,成都,610041  刊 名： 生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)雜志  ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF BIOMEDICAL ENGINEERING  年，卷(期)： 2006 23(3)  分類(lèi)號(hào)： Q78  關(guān)鍵詞： 軍團(tuán)菌   lvgA基因   聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)   基因表達(dá)  

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