重組豬卵透明帶抗原pZP3α在畢赤酵母中的分泌表達

為制備rpZP3α蛋白供發(fā)展避孕疫苗研究,將編碼天然提取pZP3α上的DNA序列(446～1423)插入至畢赤酵母分泌型表達載體pPICZαA上,重組質(zhì)粒pPICZαA-pZP3α線性化后通過電穿孔轉(zhuǎn)入畢赤酵母GS115,經(jīng)抗生素Zeocin篩選獲得工程菌.在2L發(fā)酵罐中,用甲醇誘導(dǎo)工程菌進行高密度發(fā)酵生產(chǎn)rpZP3α.分離濃縮發(fā)酵上清液,通過螯合銅離子的親和柱純化rpZP3α,用SDS-PAGE和Western blot進行鑒定,以Quantity One軟件對rpZP3α進行定量分析并計算純度和回收率.用rpZP3α免疫家兔,以ELISA法和間接免疫熒光法檢測抗血清對rpZP3α和豬卵透明帶的抗體反應(yīng).獲得了分泌表達rpZP3α的工程菌,其高密度發(fā)酵產(chǎn)物經(jīng)分離純化后獲得能與抗pZP3抗體反應(yīng)的46kD成分,命名為rpZP3α,平均產(chǎn)量為8mg/L,純度達92%,回收率為63%.用其免疫家兔獲得抗rpZP3α抗血清,ELISA測定顯示能與rpZP3α和天然提取pZP3反應(yīng).間接免疫熒光法分析顯示抗rpZP3α抗血清能與豬卵透明帶反應(yīng),產(chǎn)生亮綠熒光.用酵母表達系統(tǒng)成功表達了rpZP3α,該蛋白保留有天然pZP3的免疫活性.

作 者： 高彥茹 潘善培 謝琪璇 肖鑾娟 柯瓊 李文星 史衛(wèi)衛(wèi) GAO Yan-Ru PAN Shan-Pei XIE Qi-Xuan XIAO Luan-Juan KE Qiong LI Wen-Xing SHI Wei-Wei   作者單位： 暨南大學(xué)生殖免疫研究所,廣州,510632  刊 名： 生物工程學(xué)報  ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2006 22(3)  分類號： Q786  關(guān)鍵詞： 重組pZPα蛋白   畢赤酵母   分泌表達  

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