豬胸膜肺炎放線桿菌血清1型信號標簽誘導突變體庫的構(gòu)建

本研究以自殺性質(zhì)粒pUT攜帶含有信號標簽的Mini-Tn5轉(zhuǎn)座子對豬胸膜肺炎放線桿菌血清1型菌進行轉(zhuǎn)座誘變,構(gòu)建了帶有12對特異性信號標簽的Mini-Tn5轉(zhuǎn)座子的pUT自殺質(zhì)粒,轉(zhuǎn)化到供體菌E.coliβ2155后,利用雙親本濾膜雜交法與受體豬胸膜肺炎放線桿菌血清1型菌(APP1)進行接合轉(zhuǎn)移,構(gòu)建并優(yōu)化了接合轉(zhuǎn)移體系.利用抗性和營養(yǎng)缺陷培養(yǎng)平板篩選得到接合突變體,通過抗性通用引物與12個特異標簽引物和胸膜肺炎放線桿菌毒素IV(ApxIV)鑒定引物分別對這些突變體進行了PCR鑒定和測序驗證.結(jié)果表明,經(jīng)過加入標簽的MinI-Tn5轉(zhuǎn)座子可以通過接合轉(zhuǎn)移的方式從供體菌E.COliβ2155中插入到APP1基因組當中,并成功構(gòu)建了12個含有特異信號標簽的重組質(zhì)粒,獲得了APP1的12個轉(zhuǎn)座突變體庫,經(jīng)篩選鑒定后得到561個突變株.這為研究APP1的功能基因和篩選特定突變株提供了必要的基礎.

作 者： HE Ming-lei 赫明雷 劉慧芳 劉思國 司薇 王春來 楊金國 杜艷芬 王聃   作者單位：   刊 名： 中國動物傳染病學報  英文刊名： CHINESE JOURNAL OF VETERINARY PARASITOLOGY  年，卷(期)： 2009 17(1)  分類號： S852.619  關鍵詞： 胸膜肺炎放線桿茵   轉(zhuǎn)座子   信號標簽  

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