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彩超在小鼠原位肝癌移植模型中的應(yīng)用研究

時(shí)間:2023-04-28 08:23:12 社會(huì)文化論文 我要投稿
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彩超在小鼠原位肝癌移植模型中的應(yīng)用研究

摘要:

彩超在小鼠原位肝癌移植模型中的應(yīng)用研究

目的:

研究應(yīng)用彩超評(píng)價(jià)小鼠原位肝癌移植造模成功的可行性。方法:建立小鼠肝癌原位移植模型, 應(yīng)用彩超方法觀察(3、5、9、16d)不同造模時(shí)間小鼠肝癌原位移植造模情況,同時(shí)與解剖觀察腫瘤比較;并取 其腫瘤作病理組織學(xué)檢查。結(jié)果:彩超在模型建立中后期9d組腫瘤的檢測(cè)結(jié)果與解剖觀察情況相近,腫瘤檢出率 可達(dá)90%。結(jié)論:彩超檢測(cè)方法是一種無(wú)創(chuàng)診斷,可用于小鼠原位肝癌模型的實(shí)時(shí)評(píng)價(jià),為建立小鼠原位移植肝癌 模型的判定提供科學(xué)依據(jù).畢業(yè)論文www.lotusphilosophies.com

   

關(guān)鍵詞:彩超;小鼠原位肝癌;模型

目前,肝癌治療措施強(qiáng)調(diào)實(shí)行綜合治療,即通過(guò) 西醫(yī)、中醫(yī)及其他有效的手段和方法相結(jié)合的綜合 治療。中醫(yī)藥在防治肝癌發(fā)生,減少?gòu)?fù)發(fā),減輕放、 化療的毒副作用,提高生存質(zhì)量,延長(zhǎng)生存期等方面 有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì),隨著醫(yī)藥科技的發(fā)展,中醫(yī)藥治療肝 癌的臨床療效不斷提高,并且也從多方面展開(kāi)藥物 作用機(jī)理的研究。本文開(kāi)展應(yīng)用現(xiàn)代臨床醫(yī)療的彩 超技術(shù)評(píng)價(jià)小鼠肝癌原位移植模型,試圖為中醫(yī)藥 臨床防治肝癌藥物的藥效實(shí)驗(yàn)研究提供研究手段及 其新的評(píng)價(jià)方法。本研究也是國(guó)家自然基金項(xiàng)目中 藥復(fù)方靶向給藥系統(tǒng)研究的一部分.

   

材料與方法

1.實(shí)驗(yàn)材料小鼠H22肝癌瘤株:中國(guó)協(xié)和藥 物所提供;清潔級(jí)ICR/b鼠,雄性,6—8周齡,體質(zhì)量 18—229:由吉林大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,動(dòng)物合格證 號(hào)10—1023;BCN一1 360超凈1=作臺(tái)Jouan公司;KX一41 倒置生物旺微鏡,日本OLYMPUS生產(chǎn);IU22彩超機(jī), Phllips公司.

   

2.實(shí)驗(yàn)方法

2.1小鼠原位肝癌模型的建立及分組取腹腔 接種H22肝癌細(xì)胞株后7d的昆明種小鼠。無(wú)菌抽取H22 肝癌細(xì)胞株腹水,生理鹽水洗滌,離一31 000 r/rain,5min 棄上清,臺(tái)盼藍(lán)染色計(jì)數(shù),生理鹽水調(diào)整癌細(xì)胞數(shù)至 1×108/ml備用。健康昆明種小鼠,戊巴比妥鈉腹腔注 射麻醉,小鼠仰臥固定,備皮,常規(guī)消毒鋪巾,于上腹正 中劍突下作一約Icm的切口。輕壓雙側(cè)肋弓以擠出部分肝葉,濕紗布?jí)|于肝葉下方以保護(hù)’然后用0.25ml醫(yī) 用注射器針頭沿肝葉長(zhǎng)軸方向插人緩慢注入H22肝 癌細(xì)胞懸液0.03ml(細(xì)胞數(shù)為3×106)。在拔出針頭的 同時(shí),迅速用棉簽輕壓lmin止血,然后在針眼周嗣用 酒精棉球輕搽。小心地將肝臟網(wǎng)納入腹腔,縫合切口, 術(shù)畢【lI。術(shù)后正常飲水、進(jìn)食。術(shù)后將造模動(dòng)物隨機(jī)4 組,即模型3d組,模型5d組,模型9d組,模型16d組, 另設(shè)正常對(duì)照組。正常組動(dòng)物同樣手術(shù)方法給予生 理鹽水造模.

   

2.2彩超對(duì)小鼠肝癌造模的檢測(cè)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分4 次進(jìn)行B超檢測(cè),每次取5只正常組進(jìn)行對(duì)照,分別于 造模第3、5、9、16H將正常對(duì)照組和模型組小鼠腹部 剪毛處理,用彩超儀對(duì)小鼠肝臟進(jìn)行掃描,選擇最 適宜條件。彩超檢測(cè)條件:深度:2.0,增益指數(shù)74%, 探頭頻率7.5—12MHz。隨后,脫椎處死小鼠,開(kāi)腹用 游標(biāo)卡尺測(cè)量腫瘤大小,并與彩超結(jié)果進(jìn)行對(duì)照.

   

2.3病理形態(tài)學(xué)觀察剝離肝臟及其腫瘤,10% 甲醛固定,常規(guī)石蠟包埋,切片,HE染色,在光學(xué)顯 微鏡下進(jìn)行組織學(xué)檢查.

   

結(jié)果

1.彩超檢測(cè)與解剖肉眼觀察結(jié)果正常組小鼠 肝臟彩超檢測(cè)結(jié)果表明:超聲顯示弱回聲,無(wú)結(jié)節(jié); 正常小鼠解剖肝臟表明:肝臟無(wú)結(jié)節(jié)。模型組小鼠肝 臟超聲與解剖檢測(cè)結(jié)果表明:小鼠原位移植肝癌存 在高回聲、等回聲、低回聲3種類型,其中以高回聲多 見(jiàn)并較易發(fā)現(xiàn)和測(cè)量。當(dāng)腫瘤生長(zhǎng)3d時(shí),有50%/b鼠 生長(zhǎng)出平均0.2cm×0.14cm大小的結(jié)節(jié),此ft,寸B超顯 示10只小鼠均無(wú)結(jié)節(jié);當(dāng)造模第5天時(shí),有l(wèi)OO%/Jx鼠 長(zhǎng)出平均o.57cmx0.43em大小不等的結(jié)節(jié)或腫塊,并 有1只呈彌漫性生長(zhǎng),彩超僅檢查出一只實(shí)際大小在 0.29emx0.29em的腫瘤,檢出率占總數(shù)的10%;當(dāng)造 模第9天時(shí),有100%/1\"鼠長(zhǎng)出平均0.89cmx0.43era, 彩超的檢出率可達(dá)90%;至第16天時(shí),有100%d、鼠長(zhǎng) 出0.89emx0.66em的腫瘤并且小鼠多伴有腹水,此時(shí) 彩超的檢出率仍為90%。結(jié)果見(jiàn)表l、圖l.

    表1 彩超與解剖觀察不問(wèn)時(shí)間小鼠原位移植肝癌情況∞=10) 彩超檢查解剖觀察造模天數(shù)麗面天萬(wàn)可忑夏二了蕊麗看夭不ii忑i再再薄 2.病理學(xué)檢測(cè)結(jié)果正常組小鼠肝d,nf清晰, 肝細(xì)胞索、肝竇排列整齊,匯管區(qū)結(jié)構(gòu)清楚;肝癌模 型組腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛,較為彌散,細(xì)胞核體積較 大,深染,多呈圓形或橢圓形,胞漿豐富略嗜堿性, 有的胞漿呈空泡狀,可見(jiàn)病理性核分裂與瘤巨細(xì)胞, 見(jiàn)圖1.

   

討論

目前,建立小鼠肝癌動(dòng)物模型方法主要有皮下 移植和肝癌的原位移植,而肝癌的原位移植能夠更 好地模仿人肝癌體內(nèi)的血供和生長(zhǎng)環(huán)境,提供與肝 癌病人相似的肝癌生物學(xué)特性,更好地反映抗癌藥 物的藥效學(xué)指標(biāo)。但此種方法要求接種手法準(zhǔn)確, 對(duì)操作環(huán)境要求必須無(wú)菌,尤其此種模型建立是否 成功常采用動(dòng)物處死后評(píng)價(jià)。這是大多數(shù)研究者謹(jǐn) 慎采用此方法的原因之。目前,采用小鼠原位肝癌 移植模型進(jìn)行抗腫瘤藥物研究,缺少行之有效的模 型建立評(píng)價(jià)方法.

   

彩超是根據(jù)形態(tài)學(xué)的改變?yōu)榕R床診斷疾病提供證據(jù)的,它不像病理那樣作出準(zhǔn)確的診斷,但一些疾 病在超聲顯像中有特殊表現(xiàn),并且具有活體、實(shí)時(shí)、 動(dòng)態(tài)的優(yōu)點(diǎn)。肝癌的聲像圖有其規(guī)律性,根據(jù)這些變 化的規(guī)律,目前臨床上彩超檢查是常用的診斷方法。上常用的彩超機(jī)對(duì)于實(shí)驗(yàn)有使用方便,容易獲 得的優(yōu)點(diǎn),因此,本實(shí)驗(yàn)用臨床用彩超機(jī)對(duì)小鼠原位 移植肝腫瘤模型建立進(jìn)行評(píng)價(jià),探討用其評(píng)價(jià)小鼠 原位肝腫瘤的可行性.

   

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:彩超在對(duì)小鼠原位肝癌移植模型 建立的初期(0-5天)評(píng)價(jià)效果并不理想,檢出率僅為 10%,但在腫瘤生長(zhǎng)成熟期(大于0.57era x 0.43era)對(duì) 腫瘤的檢出率有了明顯的提高,檢出率可達(dá)到90%.

   

臨床用彩超機(jī)在小鼠原位肝癌移植模型的建立過(guò)程 中適用于腫瘤成熟期的評(píng)價(jià).臨床用彩超機(jī)探頭的常用頻率范圍為l一15 MHz,最高頻率為40 MHz,而用于小動(dòng)物實(shí)驗(yàn)檢測(cè)的 高頻率超聲系統(tǒng)探頭頻率為12.5—82.5MHz,平均中 心頻率為40 MHz,本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)臨床用彩超機(jī)探頭頻 率較低,因此如能夠采用高頻率的探頭將會(huì)提高實(shí) 驗(yàn)的檢出率和準(zhǔn)確度.

   

對(duì)小鼠原位肝癌移植模型的評(píng)價(jià)采用彩超手段 是一種無(wú)創(chuàng)診斷和監(jiān)澳fl/b鼠肝癌原位腫瘤的可行檢 測(cè)方法,可為中醫(yī)臨床防治肝癌藥物實(shí)驗(yàn)用小鼠肝 癌原位腫瘤模型建立的判斷提供科學(xué)依據(jù)。此檢測(cè) 方法也可用于其它實(shí)驗(yàn)動(dòng)物肝癌模型建立的評(píng)價(jià).

   

參考文獻(xiàn)

【l】李志字,薛華,何生,等.葡萄球菌腸毒素A脂質(zhì)體對(duì)小鼠原位移 植m2肝癌的治療作用.中華肝膽外科雜志嬲,10(10陽(yáng)B,_6% LI Zhiyu,XUE Hua,HE Sheng,et a1.Antitumor efficacy of staphylococcal enterotoxin A liposomesin vivo.China J Hepatobiliary su瑪2004,l()(10):683-686

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